Determination of focus-forming unit

Determination of focus-forming units (FFU)
The viruses were titrated 10-fold from 1:10 to 1: 1010 in MEM and 100 μl of each dilution was transferred to confluent Vero cells in 96 well tissue culture plates, followed by incubation for 24-48 hours at 37°C and 5%CO2.

Subsequently the supernatants were removed, and the infected cells were washed 3 times with PBS, before fixation by cold acetone (80%) in distilled water for 60 minutes at -20°C. After fixation, fluorescent focus-forming assays were performed by incubation of specific antibodies on the infected cells for 30 minutes at 37°C, followed by incubation with secondary fluorescein-conjugated antibodies for additionally 30 minutes at 37°C (table 1). End point titres (FFU) were set at the last dilution giving unequivocal fluorescence.

結果 (日本語) 1:

フォーカス形成の定量ユニット （FFU）ウイルス滴定する 10 倍 1:10 をから MEM と 100 μ l の各希釈 1: 1010年合流 Vero 細胞への 96 のよく組織培養プレート、37 ℃、5 %co2 で 24-48 時間培養後に移管されました。その後、上清が削除され、および感染細胞は 3 回洗浄 PBS、-20 ℃ で 60 分間蒸留水で冷アセトン (80%) で固定する前に固定後、蛍光フォーカス形成の試金は 37 ° C (表 1) でさらに 30 分間フルオレセイン共役の二次抗体の孵化によって続く 37 ℃ で 30 分間感染細胞に特異的な抗体の孵化によって行われました。終点価 （FFU） 明確な蛍光を与える最後の希釈で設定されました。

結果 (日本語) 2:

フォーカス形成単位（FFU）の決定
MEM 1010及び各希釈の100μlを、24のためにインキュベートし、96ウェル組織培養プレート中のVero細胞をコンフルエントに移した。ウイルスは1：10~1 10倍に滴定した37℃および5％CO2で-48時間。その後、上清を除去し、感染した細胞を-20℃で60分間蒸留水中の冷アセトン（80％）による固定の前に、PBSで3回洗浄した。固定後、蛍光フォーカス形成アッセイは、37℃（表1）でさらに30分間、二次フルオレセイン結合抗体と共にインキュベートし、37℃で30分間、感染した細胞に特異的な抗体をインキュベートすることにより行った。エンドポイント力価（FFU）は明確な蛍光を与える最後の希釈率で設定した。

結果 (日本語) 3:

フォーカス形成単位の決定（ffu）ウイルス1 : 10から1までの10倍で滴定：1010においてmemと希釈の100μl 96穴プレートで合流したvero細胞へ移され、その後37°cと5 % co 2で24〜48時間培養します。次に上澄み液を除去すると、感染した細胞をpbsで3回洗浄した冷アセトンによる固定の前に（80）のための60分に－20℃固定後の蒸留水に、蛍光フォーカスアッセイは、感染した細胞に特異的な抗体のインキュベーションによって30分37°cで行われた、第二のフルオレセインとのインキュベーションによって共役抗体をさらに30分37°cで（表1）。エンドポイントの力価（ffu）the last希釈の明確なfluorescenceを与えることであった。